產品名稱:AO熒光染色試劑盒
產品型號:CA1142
產品特點:產品名稱:AO熒光染色試劑盒儲存條件2-8℃,避光,有效期6個月規格100T單位盒
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AO熒光染色試劑盒
產品內容:
100T | Storage | |
試劑(A): AO Stain | 500μl | 4℃ 避光 |
試劑(B): AO Stain Buffer(10×) | 10ml | 4℃ |
產品說明:
AO屬于三環雜芳香燃料,可以標記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性,能透過細胞膜,使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細胞內DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結合方式主要有:1、插入性結合,AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,這種結合方式主要為AO與DNA的結合,其熒光發射峰為530nm,激發后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合,這種結合方式主要為AO與RNA的結合,其熒光發射峰為640nm,激發后呈紅色熒光,少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,與DNA單鏈或RNA結合時發桔黃色或橙紅色熒光。
AO熒光染色試劑盒(AO Detection Kit)主要由AO Stain、AO Stain Buffer組成,常用于細胞凋亡的檢測。染色后在熒光顯微鏡下觀察,AO可透過正常細胞膜,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。AO染色常與EB染色合用雙染,EB只染死細胞使之產生桔黃色熒光,由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
自備材料:
熒光顯微鏡, 低速離心機,PBS,細胞計數板, 載玻片、蓋玻片
操作步驟(僅供參考):
(一) AO單獨染色
1、 收集細胞(采用流式細胞儀檢測時,應先固定細胞),用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次,加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞,計數并調節細胞濃度至106/ml。
2、 取適量的細胞懸液和AO Stain,按照細胞懸液:AO Stain=19:1的比例混合,輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察,一般取95μl細胞懸液和5μl AO Stain混合即可。
3、 室溫避光染色15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分析。
4、 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長488nm,阻斷濾光片波長515nm),計數并拍照。
染色結果:
正常細胞 | 細胞被均勻染成黃綠色熒光 |
凋亡細胞 | 染色質濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒 |
(二) AO/EB雙染色
1、 收集細胞,用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次,加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞,計數并調節細胞濃度至106/ml。
2、 取適量的細胞懸液和AO Stain,按照細胞懸液:AO Stain=19:1的比例混合,并加入適量EB染色液,輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察,一般取95μl細胞懸液和5μl AO Stain混合即可。
3、 室溫避光染色15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片
4、 熒光顯微鏡濾光片515nm觀察,計數并拍照。
染色結果:
正常細胞 | 均勻染成綠色熒光 |
壞死細胞 | 細胞桔黃色熒光 |
凋亡細胞 | 染色質濃縮,細胞核碎裂,被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆粒或見胞質芽狀突起。 |
計算細胞凋亡率和死亡率:
細胞死亡率=凋亡細胞/細胞總數×100% 細胞壞死率=壞死細胞/細胞總數×100%
注意事項:
1. AO染色常不EB染色合用,可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
2. 如有低溫離心機進行離心效果更佳,同時應注意減少試劑暴露于強光下的時間。
3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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